Типирование вируса гриппа А (Influenza virus A) (H1N1, H3N2)

Идентификация субтипов H1N1 и H3N2 вируса гриппа А методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР).

Influenza virus A RT-PCR subtyping, Influenza virus reverse transcription PCR test.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокрота.

Вирус гриппа относится к РНК-содержащим вирусам. Род вирусов гриппа включает три типа вирусов: А, В и С. Вирусная частица имеет сферическую форму, в центре которой находится генетический материал вируса - РНК, а в оболочке присутствуют сложные белки - гемагглютинин (Н) и нейраминидаза (N). Для вирусов гриппа типа А характерна постоянная изменчивость этих поверхностных белков: на данный момент известно 15 вариантов гемагглютинина и 9 вариантов нейраминидазы. Их сочетание в определенной комбинации определяет субтип вируса. Вирусы субтипов H1N1 и H3N2 вызывают сезонный грипп человека.

Попадая в организм человека, вирус гриппа проникает в клетки эпителия слизистой оболочки дыхательных путей и размножается в них. Пораженные вирусом клетки дегенерируют, погибают и отторгаются. Таким образом, в отделяемом дыхательных путей (слизь, мокрота и т.п.) присутствуют погибшие эпителиальные клетки вместе с вирусными частицами.

Идентификация субтипа вируса проводится методом полимеразной цепной реакции. Принцип метода основан на обнаружении в материале специфичных фрагментов вирусной РНК, их избирательном синтезе с образованием огромного числа копий, что позволяет их легко детектировать, в том числе визуально. К преимуществам метода ПЦР можно отнести:

• прямое определение наличия возбудителя - выявление специфического участка РНК возбудителя дает прямое указание на присутствие вируса;
• высокую специфичность - в исследуемом материале идентифицируется уникальный, характерный только для данного вируса фрагмент РНК;
• высокую чувствительность - ПЦР позволяет обнаружить возбудитель, даже если его исходная концентрация в исследуемом материале чрезвычайно мала.

Однако стоит отметить, что обнаружение вирусной РНК методом ПЦР не обязательно указывает на обнаружение жизнеспособного вируса или продолжающееся его размножение.

• Для идентификации субтипа вируса гриппа.

• При нетипичных проявлениях заболевания;
• при высоком риске осложнений от гриппа (возраст более 65 и менее 2 лет, беременные, а также женщины в период первых двух недель после родов, лица с хроническими заболеваниями легких, сердца, почек, пациенты с иммунодефицитом или гематологическими заболеваниями);
• при идентификации возбудителя у пациентов, заболевших вне эпидемиологического сезона.

Референсные значения: не обнаружено.

• Положительный результат - если искомый фрагмент вирусной РНК обнаружен - инфицирование вирусом гриппа А определенного субтипа.
• Отрицательный результат - если искомый фрагмент вирусной РНК не обнаружен - отсутствие инфекции.

• Количество дней, прошедшее от начала болезни (после 4 дней возрастает вероятность необнаружения вируса).
• Исследуемый образец - при инфекции нижних дыхательных путей вирус может не выявляться в образце, полученном из верхних дыхательных путей (мазки из носа, ротоглотки). В таких случаях необходимо повторить анализ с исследованием отделяемого нижних дыхательных путей.

• У иммунокомпетентных лиц с неосложненным гриппом вирусовыделение в верхних дыхательных путях, как правило, значительно уменьшается после 4 дней болезни, соответственно, снижается вероятность выделения возбудителя. Поэтому образцы для исследования у таких пациентов должны быть получены в первые четыре дня заболевания, когда выделение вируса максимально. И напротив, у пациентов с ослабленным иммунитетом и при инфекции нижних дыхательных путей (вирусная пневмония) выделение вируса в бронхиальный секрет сохраняется дольше.
• Ожидание результата исследования или отрицательный результат при очевидной клинической картине не должны быть препятствием для назначения противовирусной терапии.

• Общий анализ крови с лейкоцитарной формулой
• С-реактивный белок
• Influenza virus A/H1, РНК [реал-тайм ПЦР]
• Mycoplasma pneumoniae, ДНК [ПЦР]
• Adenovirus, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Streptococcus pneumoniae, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Инфекционист, терапевт, врач общей практики, педиатр, эпидемиолог.

1. Инфекционные болезни: национальное руководство / Под ред. Н. Д. Ющука, Ю. Я. Венгерова. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. С. 701-710.
2. Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство: в 2 т. - T. II / Под ред. В. В. Долгова, В. В. Меньшикова. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. С. 649-653.
3. Guidance for Clinicians on the Use of RT-PCR and Other Molecular Assays for Diagnosis of Influenza Virus Infection by Centers of Disease Control and Prevention, U.S. Department of Health and Human Services, 2016.
4. Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Page 1316.