FISH-анализ делеции 12p

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH), молекулярная диагностика онкогематологических заболеваний (миелодиспластический синдром с неблагоприятным течением, острый миелобластный лейкоз).

Fluorescent in situ hybridization (FISH), molecular diagnostics of oncohematological diseases: myelodysplastic syndrome with an unfavorable course or acute myeloid leukemia.

Флуоресцентная гибридизация in situ.

Костный мозг.

1. Исключить (по согласованию с врачом) прием антибактериальных и химиотерапевтических препаратов в течение 14 дней до исследования.
2. Исследование рекомендуется проводить не ранее чем через 2 недели после перенесенных инфекционных / острых воспалительных заболеваний.

Анализ с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hybridization, FISH) - молекулярно‐цитогенетический метод для идентификации генетических аберраций (отклонений от нормы). Изначально данный метод использовался как исследовательский для выявления специфической ДНК-последовательности в хромосомах, но благодаря прогностической ценности был внедрен в клиническую практику.

Метод основан на использовании флуоресцентномеченых ДНК-зондов, которые представляют собой искусственно синтезированные фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. ДНК-зонды различаются по составу, специфичности; для каждой хромосомной аномалии используются свои ДНК-зонды. Также зонды различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие - к конкретному локусу (фрагменту хромосомы или гена).

После специальной процедуры денатурации молекула ДНК приобретает вид одноцепочечной нити. ДНК-зонд гибридизуется (связывается) с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа. Это интерпретируется как положительный результат FISH-теста. При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-зонды в ходе реакции "отмываются", что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет оценить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию.

FISH имеет широкие возможности в клинической онкологии для обнаружения хромосомных аномалий в опухолевых клетках. Метод позволяет исследовать генетический состав клетки как во время митоза, так и в интерфазе. FISH имеет высокую чувствительность - позволяет обнаружить индивидуальные гены, кроме того, в одном препарате может быть использовано несколько зондов с различными красителями.

FISH-анализ широко применяется при лимфопролиферативных заболеваниях, являясь в ряде случаев определяющим для подтверждения диагноза.

Острый миелобластный лейкоз (ОМЛ) признан основным типом лейкоза взрослого и пожилого возраста, на долю которого приходится 80 % случаев в этой возрастной группе. Одни из распространенных хромосомных аберраций при ОМЛ - аберрации в коротком плече хромосомы 12, которые обычно связаны с плохим прогнозом. Аберрации 12p-хромосом включают в себя транслокации, делеции, добавления и дупликации. У пациентов с небольшими 12p-делециями (del(12p) прогноз в целом лучше, чем у других пациентов с 12p-аберрациями с меньшей частотой хромосомных перестроек. Делеции не могут иметь специфических цитогенетических подгрупп или изменений, специфичных для заболевания.

Миелодиспластический синдром (МДС) представляет собой группу миелоидных заболеваний, характеризующихся дефектом костномозгового кроветворения; они вызывают периферические цитопении, рецидивирующие цитогенетические нарушения и переменный риск прогрессирования в острый миелоидный лейкоз. При МДС делеция короткого плеча хромосомы 12 характерная, но редкая аномалия. Как единичная аномалия она была описана у 0,6-5 % пациентов при первоначальном диагнозе и как дополнительная аберрация у 4 %. Изолированная делеция 12-й хромосомы классифицируется как прогностически промежуточный риск рецидива. Del(12p) часто представляет собой очень маленькую интерстициальную делецию с общей удаленной областью между 12p12.2 и 12p13.1. На этом участке расположен ген ETV6 (TEL),который является фактором транскрипции для генов, контролирующих развитие клеток кроветворной ткани, и инактивируется данной делецией.

• Для уточнения диагноза при подозрении на миелодиспластический синдром или острый миелобластный лейкоз.
• Для повторного консультирования при подозрении на злокачественное заболевание крови.
• Для выбора тактики лечения и прогноза заболевания, которые зависят от хромосомного состава опухоли.
• Чтобы определить наличие или отсутствие конкретной хромосомной аберрации.

• При подозрении на злокачественное заболевание крови для выбора тактики лечения и прогноза, который зависит от хромосомного состава опухоли.
• Для подтверждения диагноза при наличии клинических предпосылок: клиническая картина заболевания, изменения гемограммы, наличие специфических синдромов.
• Для контроля "минимальной остаточной болезни" после химиотерапии или пересадки костного мозга.

Гематолог, онколог.

[02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)

[02-027] Ретикулоциты

[12-077] Морфологическое исследование трепанобиоптата костного мозга

[16-012] Цитогенетический анализ клеток костного мозга (кариотип)

[18-114] FISH-анализ делеции 20q

[18-117] FISH-анализ перестроек 3q

[18-118] FISH анализ перестроек 5 хромосомы

[18-119] FISH анализ перестроек 7 хромосомы

[18-123] FISH-анализ перестроек MLL гена

• El-Khazragy N, Ghozy S, Matbouly S. Interaction between 12p chromosomal abnormalities and Lnc-HOTAIR mediated pathway in acute myeloid leukemia. J Cell Biochem. 2019 Sep;120(9):15288-15296.
• Braulke F, Müller-Thomas C, Götze K. Frequency of del(12p) is commonly underestimated in myelodysplastic syndromes: Results from a German diagnostic study in comparison with an international control group. Genes Chromosomes Cancer. 2015 Dec;54(12):809-17.
• Pagáčová E, Falk M, Falková I. Frequent chromatin rearrangements in myelodysplastic syndromes--what stands behind? Folia Biol (Praha). 2014;60 Suppl 1:1-7. PMID: 25369334.