FISH-анализ перестроек ATM гена

Флуоресцентная гибридизация in situ, молекулярная диагностика онкогематологических заболеваний - хронический лимфолейкоз.

Fluorescent in situ hybridization, molecular diagnostics of oncohematological diseases: chronic lymphocytic leukemia.

Флуоресцентная гибридизация in situ.

Венозная кровь.

Подготовки не требуется.

Преимущества исследования

1. Является чувствительным методом для идентификации хромосомных аберраций при количествах лейкозных клеток менее 109, обеспечивая при этом быстрый анализ большого (> 500) числа клеток. Метод обладает высокой точностью для идентификации неизвестных фрагментов хромосомной ДНК.
2. Исследование FISH может быть применено как к метафазным, так и к интерфазным ядрам, то есть к неделящимся клеткам.
3. Позволяет определить даже самые небольшие генетические аномалии, которые нельзя рассмотреть при помощи обычного микроскопа и стандартных окрасок.

Анализ с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hybridization, FISH) - молекулярно‐цитогенетический метод для идентификации генетических аберраций (отклонений от нормы). Изначально данный метод использовался как исследовательский для выявления специфической ДНК-последовательности в хромосомах, но благодаря прогностической и предсказательной ценности был внедрен в клиническую практику.

Метод основан на использовании флуоресцентно-меченых ДНК-зондов, которые представляют собой искусственно синтезированные фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. ДНК-зонды различаются по специфичности - для каждой хромосомной аномалии используются свои ДНК-зонды. Также зонды различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие - к конкретному локусу (фрагменту хромосомы или гена).

После специальной процедуры - денатурации молекула ДНК приобретает вид одноцепочечной нити. ДНК-зонд гибридизуется (связывается) с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа. Данное состояние интерпретируется как положительный результат FISH-теста. При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-зонды в ходе реакции "отмываются", что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет оценить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест - это еще и количественный метод.

FISH имеет широкие возможности в клинической онкологии для обнаружения хромосомных аномалий в опухолевых клетках. Исследование определяет генетический состав клетки как во время митоза, так и в интерфазе. FISH имеет высокую чувствительность - позволяет обнаружить индивидуальные гены, кроме того, в одном препарате может быть использовано несколько зондов с различными красителями.

FISH-анализ широко применяется при лимфопролиферативных заболеваниях, являясь в ряде случаев определяющим фактором для подтверждения диагноза.

Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) - злокачественное новообразование из зрелых В-лимфоцитов. Это распространенная форма лимфоидных злокачественных новообразований у взрослых, как правило, старше 65 лет, на долю которых приходится почти 11 % всех гематологических новообразований и 24 % всех лейкозов. Оценка прогностических факторов на момент постановки диагноза определяет сроки и стратегию лечения. Белок ATM - ключевой участник пути передачи внутриклеточного сигнала, который активируется в ответ на двухцепочечные разрывы ДНК для синхронизации ее репарации (восстановления целостности). При ХЛЛ мутации в гене АТМ встречаются чаще, чем мутации в гене TP53. Возникновение таких мутаций приводит к тому, что пациенты с ХЛЛ становятся невосприимчивыми к химиотерапевтическим препаратам, таким как хлорамбуцил и флударабин. Мутации гена ATM, как правило, ассоциированы с ухудшением выживаемости пациентов с ХЛЛ.

• Для уточнения диагноза при подозрении на хронический лимфолейкоз.
• Для повторного консультирования при подозрении на злокачественное заболевание крови.
• Для выбора тактики лечения и прогноза заболевания, которые зависят от хромосомного состава опухоли.
• Чтобы определить наличие или отсутствие конкретной хромосомной аберрации.

• При подозрении на злокачественное заболевание крови, для выбора тактики лечения и оценки прогноза, который зависит от хромосомного состава опухоли.
• Для подтверждения диагноза при наличии клинических предпосылок: клиническая картина заболевания, изменения гемограммы, наличие специфических синдромов.
• Для контроля "минимальной остаточной болезни" после химиотерапии или пересадки костного мозга.

Гематолог, онколог.

Также рекомендуется.

• [02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)
• [02-027] Ретикулоциты
• [16-012] Цитогенетический анализ клеток костного мозга (кариотип)
• [18-115] FISH-анализ делеции ТР53 гена
• [18-116] FISH анализ моносомии, делеции 13-й хромосомы - (del(13),-13)
• [18-133] FISH-анализ трисомии 12-й хромосомы (+12)

• Austen B, Powell JE, Alvi A, et al. Mutations in the ATM gene lead to impaired overall and treatment-free survival that is independent of IGVH mutation status in patients with B-CLL. Blood. 2005 Nov 1;106(9):3175-82.
• Baghaei Vaji F, Boroumand Nasr A, Rezvani A. Prognostic significance of ATM mutations in chronic lymphocytic leukemia: A meta-analysis. Leuk Res. 2021 Dec;111:106729.
• Stankovic T, Skowronska A. The role of ATM mutations and 11q deletions in disease progression in chronic lymphocytic leukemia. Leuk Lymphoma. 2014 Jun;55(6):1227-39.