FISH-анализ трисомии 12-й хромосомы (+ 12)

Флуоресцентная гибридизация in situ, молекулярная диагностика онкогематологических заболеваний - хронический лимфолейкоз.

Fluorescent in situ hybridization, molecular diagnostics of oncohematological diseases - chronic lymphocytic leukemia.

Флуоресцентная гибридизация in situ.

Материал для исследования

Венозная кровь.

Подготовки не требуется.

Преимущества исследования

1. Является чувствительным методом для идентификации хромосомных аберраций при количествах лейкозных клеток менее 109, обеспечивая при этом быстрый анализ большого (> 500) числа клеток. Метод обладает высокой точностью для идентификации неизвестных фрагментов хромосомной ДНК.
2. Исследование FISH может быть применено как к метафазным, так и к интерфазным ядрам, то есть к неделящимся клеткам.
3. Позволяет определить даже самые небольшие генетические аномалии, которые нельзя рассмотреть при помощи обычного микроскопа и стандартных окрасок.

Анализ с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hybridization, FISH) - молекулярно‐цитогенетический метод для идентификации генетических аберраций (отклонений от нормы). Изначально данный метод использовался как исследовательский для выявления специфической ДНК-последовательности в хромосомах, но благодаря прогностической и предсказательной ценности был внедрен в клиническую практику.

Метод основан на использовании флуоресцентно-меченых ДНК-зондов, которые представляют собой искусственно синтезированные фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. ДНК-зонды различаются по специфичности - для каждой хромосомной аномалии используются свои ДНК-зонды. Также зонды различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие - к конкретному локусу (фрагменту хромосомы или гена).

После специальной процедуры - денатурации молекула ДНК приобретает вид одноцепочечной нити. ДНК-зонд гибридизуется (связывается) с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа. Данное состояние интерпретируется как положительный результат FISH-теста. При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-зонды в ходе реакции "отмываются", что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет не только выявить флуоресцентный сигнал, но и определить его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест - это еще и количественный анализ.

FISH имеет широкие возможности в клинической онкологии для обнаружения хромосомных аномалий в опухолевых клетках. Исследование определяет генетический состав клетки как во время митоза, так и в интерфазе. FISH имеет высокую чувствительность - позволяет обнаружить индивидуальные гены, кроме того, в одном препарате может быть использовано несколько зондов с различными красителями.

FISH-анализ широко применяется при лимфопролиферативных заболеваниях, являясь в ряде случаев определяющим фактором для подтверждения диагноза.

Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) - наиболее распространенный лейкоз. Он характеризуется широкой клинической гетерогенностью, начиная от пациентов с высокостабильным заболеванием в течение многих лет и заканчивая пациентами с агрессивным течением заболевания. Среди цитогенетических аномалий трисомия 12 (+ 12) возникает примерно в 15-18 % случаев ХЛЛ. У пациентов, у которых она встречается, наблюдается более быстрое прогрессирование заболевания, поражение лимфатических узлов и тенденция к генерализации патологического процесса. Было продемонстрировано, что клетки ХЛЛ, содержащие + 12, характеризуются более низкой экспрессией гена IRF4 по сравнению с другими цитогенетическими группами. Этот ген - регулятор транскрипции генов, выполняющих критические функции в различных типах иммунных клеток. Мутационное повреждение гена IRF4 блокирует развитие апоптоза в опухолевых клетках и вызывает состояние химиорезистентности. Таким образом, трисомия 12 (+ 12) - неблагоприятный прогностический фактор.

• Для уточнения диагноза при подозрении на миелодиспластический синдром или острый миелобластный лейкоз.
• Для повторного консультирования при подозрении на злокачественное заболевание крови.
• Для выбора тактики лечения и прогноза заболевания, которые зависят от хромосомного состава опухоли.
• Чтобы определить наличие или отсутствие конкретной хромосомной аберрации.

• При подозрении на злокачественное заболевание крови, для выбора тактики лечения и оценки прогноза, который зависит от хромосомного состава опухоли.
• Для подтверждения диагноза при клинических предпосылках: клиническая картина заболевания, изменения гемограммы, наличие специфических синдромов.
• Для контроля "минимальной остаточной болезни" после химиотерапии или пересадки костного мозга.

Гематолог, онколог.

• [02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)
• [02-027] Ретикулоциты
• [16-012] Цитогенетический анализ клеток костного мозга (кариотип)
• [18-115] FISH анализ делеции ТР53 гена
• [18-116] FISH анализ моносомии, делеции 13-й хромосомы - (del(13),-13)

• Fiorcari S, Maffei R, Atene CG, et al. Notch2 Increases the Resistance to Venetoclax-Induced Apoptosis in Chronic Lymphocytic Leukemia B Cells by Inducing Mcl-1. Front Oncol. 2022 Jan 6;11:777587.
• Pepe F, Rassenti LZ, Pekarsky Y, et al. A large fraction of trisomy 12, 17p-, and 11q- CLL cases carry unidentified microdeletions of miR-15a/16-1. Proc Natl Acad Sci U S A. 2022 Jan 25;119(4).
• Quijano S, López A, Rasillo A, et al. Impact of trisomy 12, del(13q), del(17p), and del(11q) on the immunophenotype, DNA ploidy status, and proliferative rate of leukemic B-cells in chronic lymphocytic leukemia. Cytometry B Clin Cytom. 2008 May;74(3):139-49.