Комплексное гистологическое и иммуногистохимическое исследование с определением хронического эндометрита (фаза пролиферации)

Гистологическая и ИГХ диагностика хронического эндометрита (фаза пролиферации (CD20/CD138/CD56/HLA-DR)).

Сhronic endometritis Histology & Immunohistochemistry (CD20, CD138, CD56, HLA-DR).

Образец ткани (биоптат) из полости матки.

1. Как и перед любой инвазивной процедурой, перед биопсией эндометрия необходимо заранее сообщить врачу о приеме лекарственных средств, влияющих на свертываемость крови (например, аспирин, варфарин, ксарелто, эликвис, прадакса).

Эндометрий - это внутренняя часть слизистой оболочки матки, обращенная к ее полости. Его основная функция состоит в создании оптимальных условий для имплантации эмбриона в матку и успешного наступления беременности. Ведущее значение в процессе имплантации имеет рецептивность эндометрия - способность воспринимать оплодотворенную яйцеклетку и обеспечивать ее прикрепление и внедрение в полость матки. На рецептивность оказывают влияние структурные изменения эндометрия, происходящие циклически, соответственно стадиям менструального цикла, и синхронизированные посредством гормональной регуляции с процессами созревания яйцеклетки. Структурная перестройка эндометрия контролируется стероидными гормонами яичников - эстрогеном и прогестероном, влияние которых опосредуется через соответствующие рецепторы, располагающиеся внутри клеток эндометрия. Достаточный уровень рецепторов каждого гормона необходим для подготовки эндометрия к имплантации эмбриона.

Нарушение рецептивности эндометрия, а также его взаимодействия с оплодотворенной яйцеклеткой являются причиной бесплодия, невынашивания беременности и неудач вспомогательных репродуктивных технологий, в том числе экстракорпорального оплодотворения, при котором, по некоторым данным, около 65% неудачных попыток связаны именно с патологией эндометрия. Значительная роль в генезе эндометриальной дисфункции, сопровождающейся нарушением рецептивности эндометрия, принадлежит хроническому эндометриту. Длительное течение воспалительного процесса в слизистой оболочке тела матки приводит к структурным нарушениям эндометрия и снижению или практически полному отсутствию на его клетках эстрогеновых и прогестероновых рецепторов. Однако при адекватном лечении возможно восстановление физиологического состояния эндометрия и успешное наступление беременности. В связи с этим диагностика хронического эндометрита занимает важное место в определении причин бесплодия и неудачных попыток вспомогательных репродуктивных технологий.

На первом этапе исследования биоптата в обязательном порядке проводится гистологическое исследование, которое позволяет оценить состояние клеточных структур, желез и сосудов эндометрия, а также наличие признаков воспалительных изменений. Морфологическим субстратом хронического эндометрита являются лимфоидные инфильтраты в слое эндометрия, состоящие из лимфоцитов и плазматических клеток. В последнее время в связи с широким применением противомикробной и противовоспалительной терапии классические гистологические признаки хронического эндометрита выявляются все реже, что требует проведения дополнительных методов диагностики. В состав данного комплекса входит иммуногистохимическое исследование, которое включает в себя определение в эндометрии маркеров иммунокомпетентных клеток, степень присутствия которых коррелирует с наличием и активностью воспалительного процесса:

• CD56 - маркер лимфоцитов, относящихся к классу натуральных киллеров (NK), характеризуют в большей степени аутоиммунный компонент воспалительных изменений;
• CD138 - маркер плазматических клеток;
• CD20 - маркер зрелых В-лимфоцитов;
• HLA-DR - рецептор молекул гистосовместимости II класса, маркер активности воспалительного процесса.

Биологический материал для данного исследования целесообразно получать посредством пайпель-биопсии эндометрия или соскоба из полости матки. После взятия биоптата его помещают в ёмкость с фиксирующим раствором на 24-48 часов. По окончании фиксации биоптат декальцинируют, обезвоживают и пропитывают парафином - получаются готовые парафиновые блоки. Для гистологического исследования из парафинового блока с помощью специального микроножа нарезают тончайшие срезы, которые затем прикрепляют к предметным стеклам и красят рутинными красителями. Затем для проведения иммуногистохимического исследования срезы окрашивают растворами антител, меченных флюоресцирующими метками, специфичными к одному из исследуемых маркеров. Если в клетках эндометрия присутствует искомый рецептор, антитела связываются с ним и при просмотре стекла под специальным микроскопом можно увидеть флюоресценцию, что будет свидетельствовать о положительном результате теста. Количество применяемых растворов с антителами соответствует количеству маркеров, которые исследуются в образце. Степень флюоресценции и процент клеток, в которых она есть, лежат в основе интерпретации результатов иммуногистохимического анализа.

• Для комплексной диагностики хронического эндометрита, в том числе при бесплодии и невынашивании беременности, а также неудачных попытках экстракорпорального оплодотворения и других вспомогательных репродуктивных технологий.

• При клинических проявлениях дисфункции эндометрия - невынашивании беременности, бесплодии, неудачных попытках ЭКО и других вспомогательных репродуктивных технологий в анамнезе.

Результат гистологического исследования включает в себя макроскопическое описание биоптата (размеры, цвет), описание желез, стромального и сосудистого компонента эндометрия с наличием или отсутствием признаков воспалительных изменений.

Степень выраженности хронического эндометрита по маркерам иммунокомпетентных клеток оценивают по количеству позитивных клеток в поле зрения:

• для CD138: 0 клеток - норма, единичные клетки - слабо выраженный, 2-3 - умеренно выраженный, более 5 - выраженный;
• для CD56: до 10 клеток - норма, повышены в два раза - слабо выраженный, повышены в три раза - умеренно выраженный, повышены более чем в 4-5 раз - выраженный;
• для CD20: до 3 клеток - норма, повышены в два раза - слабо выраженный, повышены в три раза - умеренно выраженный, повышены более чем в 4-5 раз - выраженный.

Маркер HLA-DR: норма - до 10 в поле зрения, повышение характерно, в том числе, для обострения хронического эндометрита.

Результат исследования обязательно содержит интерпретацию полученных данных врачом-патоморфологом.

Качество предоставленных парафиновых блоков, опыт и квалификация врача-патоморфолога, так как иммуногистохимический метод не в полной мере стандартизирован и оценка его результатов в некоторой степени субъективна.

• Объем полученного при биопсии материала должен быть не менее одного кубического сантиметра. Это важно не только для адекватного гистологического исследования, но и для возможности проведения необходимого количества иммуногистохимических реакций.
• Противопоказанием к любому виду биопсии эндометрия являются беременность и острые инфекционно-воспалительные заболевания органов мочеполовой системы.
• Помимо исследования маркеров хронического эндометрита, в дифференциальной диагностике причин эндометриальной дисфункции значимое место также занимает определение рецептивности эндометрия.

• Планирование беременности - здоровье партнеров (для женщин)
• Планирование беременности - здоровье партнеров (для мужчин)
• Планирование беременности - гормональные анализы
• Иммуногистохимическая диагностика рецепторного статуса эндометрия (стадия секреции) - расширенное

Гинеколог, репродуктолог.

1. Эндометриальная дисфункция: алгоритм гистологического и иммуногистохимического исследования. Г. Х. Толибова, Т. Г. Траль, М. А. Клещёв, И. М. Кветной, Э. К. Айламазян. Журнал акушерства и женских болезней. Выпуск 4, том LXIV, 2015. С. 69-77.
2. Иммуногистохимические особенности хронического эндометрита при бесплодии и невынашивании беременности (обзор литературы). Е. В. Козырева, Л. Ю. Давидян. Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. № 4(36), 2015. С. 124-136.
3. Преимущества иммуногистохимического метода в диагностике хронического эндометрита. В. А. Колмык, Р. А. Насыров, Г. Ф. Кутушева. Педиатр, том VI, выпуск 1, 2015. С. 11-15.