Определение перестройки гена ALK при раке легкого методом ИГХ

Определение транслокации гена ALK (иммуногистохимический анализ).

ALK Mutation (Gene Rearrangement), EML4-ALK Fusion Protein, ALK (Anaplastic Lymphoma Receptor Tyrosine Kinase) Gene Rearrangement, ALK Gene Fusion.

Образец ткани, образец ткани в парафиновом блоке.

Специальной подготовки не требуется.

Современные успехи в лечении онкологических заболеваний во многом связаны с обнаружением молекулярных механизмов возникновения и развития злокачественных новообразований, отличающих их от клеток нормальных тканей, и появлением лекарственных препаратов, способных воздействовать на них. Такие лекарства называются таргетными, то есть действующими на определенную "цель" в опухолевой клетке. Они обладают хорошим профилем безопасности, так как в отличие от стандартной химиотерапии практически не действуют на нормальные ткани, а также характеризуются большей эффективностью. Однако назначение таргетных препаратов возможно лишь при обнаружении в опухолевых клетках специфической мишени для их действия. Сравнительно часто патологическим механизмом злокачественной трансформации клеток является нарушение в так называемых сигнальных путях. Сигнальный путь представляет собой цепь, по которой активирующий сигнал от рецептора, располагающегося на поверхности клетки, через несколько внутриклеточных белков передается в ядро. Такие внутриклеточные белки называются тирозинкиназами, их основная роль - передача сигнала от активированного рецептора путем биохимических реакций.

При немелкоклеточном раке легкого в некоторых случаях причиной злокачественной трансформации клеток может быть перестройка в гене, кодирующем одну из рецепторных тирозинкиназ - ALK (anaplastic lymphoma receptor tyrosine kinase - киназа анапластической лимфомы). В норме активация рецептора сигнального пути, в котором участвует ALK, приводит к пролиферации клеток. В гене ALK зашифрована аминокислотная последовательность как активной части фермента, так и белка-регулятора, который контролирует активность тирозинкиназы. Перестройка в гене приводит к тому, что шифр белка регулятора заменяется на другой - чаще всего кодирующий белок EML4. В результате образуется химерный - сливной - ген EML4-ALK. Белок EML4 способен облегчать белковые взаимодействия, поэтому вследствие генной перестройки ALK попадает под регулирующее влияние EML4, становится независимой от возбуждения своих рецепторов и постоянно посылает пролиферативные сигналы, что приводит к неконтролируемому делению клеток.

Транслокации EML4-ALK в клетках рака легкого были впервые выявлены в 2007 году, а через три года появился таргетный препарат, способный ингибировать активность тирозинкиназы ALK - кризотиниб (ксалкори). Встречаемость перестройки EML4-ALK при раке легкого, по разным данным, колеблется от 3 до 13 %.

Наличие в опухолевых клетках химерной тирозинкиназы может быть выявлено при иммуногистохимическом исследовании биоптата или операционного материала опухоли. Для анализа из готового парафинового блока с помощью специального микроножа нарезают тончайшие срезы, которые затем прикрепляют к предметным стеклам и красят рутинными красителями, чтобы было возможно отличить клетки друг от друга и от межклеточного вещества. Затем срезы на стеклах окрашиваются раствором антител, меченных флюоресцирующими метками, специфичными к мутированной ALK. Если в опухолевой клетке присутствует искомый фермент, антитела связываются с ним и при просмотре стекла под специальным микроскопом можно увидеть флюоресценцию, что будет свидетельствовать о положительном результате теста.

• Для выявления показаний к терапии ингибитором ALK кризотинибом.

• У пациентов с метастатическим или местнораспространенным немелкоклеточным раком легкого с отсутствием мутации гена EGFR.

Результат выдается с заключением врача.

• Положительный результат - обнаружение флюоресценции, свидетельствующее о наличии в клетках продукта экспрессии мутированного гена;
• отрицательный результат - отсутствие флюоресценции.

Качество предоставленных парафиновых блоков, опыт и квалификация врача-патоморфолога, так как иммуногистохимический метод не в полной мере стандартизирован и оценка его результатов в некоторой степени субъективна.

Несмотря на отсутствие транслокации ALK, пациентам может быть показана терапия кризотинибом - при выявлении транслокации гена ROS1, в ходе которой образуется тирозинкиназа, родственная ALK. Исследование проводится у пациентов с немелкоклеточным раком легкого с отрицательным статусом мутаций EGFR и ALK.

Позитивный и сомнительные результаты иммуногистохимического теста на транслокацию гена ALK обязательно должны быть проверены с помощью молекулярной диагностики - FISH-исследования. При этом кризотиниб может назначаться пациентам с положительным результатом иммуногистохимического исследования без ожидания результатов подтверждающего теста.

• Цитологическое исследование материала, полученного при оперативном вмешательстве
• Цитологическое исследование материала, полученного при эндоскопии (бронхоскопия)
• Гистологическое исследование биопсийного материала
• Гистологическое исследование биоптата лимфатического узла (1 узел) с использованием рутинных методик окраски
• Определение мутации гена EGFR в тканях опухолей
• Определение мутации гена BRAF в тканях опухолей
• Определение перестройки гена ALK при раке легкого методом FISH
• Определение транслокации гена ROS1 при раке легкого

Онколог, химиотерапевт.

1. Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Pages 1500-1501.
2. The Basic science of Oncology. Fifth edition. Ian F. Tannock, Robert G. Bristow, Richard P. Hill, Lea Harrington. McGrow-Hill Education, 2013. Pages 173-179.
3. Программа RUSSCO "Совершенствование молекулярно-генетической диагностики в российской федерации". Практическое руководство для врачей. www.cancergenome.ru
4. Доклад "Современные возможности таргетной терапии НМРЛ", Имянитов Е. Н. Вестник московского онкологического общества, №11 (602), 2013. С. 3-6.